在病理学和细胞生物学研究中,HE染色(Hematoxylin and Eosin Staining)是一种常用的组织切片染色技术。通过这种染色方法,可以清晰地观察到细胞核和细胞质的结构,为科学研究提供重要的形态学信息。以下是HE染色的基本操作步骤:
1. 固定:首先需要将采集的组织样本进行固定处理,通常使用甲醛溶液。固定的主要目的是保持组织结构的完整性,防止细胞和组织在后续处理过程中发生变形或溶解。
2. 脱水:固定后的组织需要依次浸入不同浓度的酒精溶液中进行脱水处理。这一过程有助于去除组织中的水分,便于下一步的透明化处理。
3. 透明化:使用二甲苯等有机溶剂对脱水后的组织进行透明化处理。透明化可以使组织更加透明,有利于石蜡的浸透,从而更好地保存组织结构。
4. 浸蜡:经过透明化的组织被浸入熔化的石蜡中,使其充分渗透并包埋在石蜡块中。这一步骤为后续切片提供了坚实的基础。
5. 切片:将包埋好的石蜡块切成薄片,通常厚度为几微米。切片的质量直接影响到最终染色的效果。
6. 脱蜡与水化:将切片从石蜡中取出,依次用二甲苯和不同浓度的酒精进行脱蜡处理,然后用水化回到水环境中。
7. 染色:
- 苏木精染色:将切片放入苏木精溶液中染色,主要使细胞核着色。
- 分化:使用弱酸性溶液对染色后的切片进行分化,去除多余的染料。
- 返蓝:用弱碱性溶液处理,使细胞核呈现蓝色。
- 伊红染色:将切片浸入伊红溶液中,使细胞质和其他结构着色。
8. 封片:最后,将染色后的切片用中性树胶或其他封片剂封固,并盖上盖玻片,以便长期保存和观察。
通过以上步骤,HE染色能够清晰展示组织和细胞的细微结构,是许多科研工作的基础工具之一。